尊龙凯时为生命科学研究提供优质的细胞培养解决方案，确保各类细胞在最优条件下生长与繁殖，以满足实验需求。以下是细胞培养和传代的规范步骤，旨在帮助科研人员获得稳定一致的细胞株。

培养条件

培养条件应保持严格的气相环境：95%空气与5%二氧化碳，温度设置为37℃，使用MEM培养基配合10% FBS和1% P/S以提供细胞所需的营养。

细胞传代方法

传代细胞时，建议在细胞密度未超过80%汇合度时进行。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放置于37℃培养箱内消化1-2分钟，显微镜观察细胞状态，若细胞已变圆并脱落，需迅速停止消化，加入5ml以上的培养基。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后，转移悬液至离心管，1000RPM离心5分钟，去掉上清并重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2比例分瓶传代，补充5-8ml新的完全培养基，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。

细胞冻存步骤

细胞在培养至80%覆盖率时，可进行冻存，操作步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS清洗细胞。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液并观察，待细胞变圆后添加培养基终止消化，轻轻吹打细胞脱落，转移至离心管中并离心。
3. 弃上清后，加入1ml尊龙凯时的无血清冻存液混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存管放于-80℃冰箱中储存24小时以上，之后可转至液氮罐中保存。

细胞复苏步骤

复苏冻存细胞时，遵循以下步骤：

1. 将冻存管放入37℃水浴中快速解冻，擦拭外部进行消毒。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，并进行离心。
3. 弃上清后重悬并接种至新的培养瓶，放入细胞培养箱中培养。

注意事项

细胞在运输过程中可能会出现脱落现象，这是正常的。如存在较多脱落，建议将培养液收集后离心，并补充胰酶消化，确保细胞健康，再按比例进行传代。使用尊龙凯时的产品可保障细胞培养的质量，从而提高实验的成功率。