【细胞介绍】HepG2细胞系是一种具有上皮样形态的细胞，源自于一名阿根廷15岁男性青年的肝细胞癌。该细胞系能够分泌多种血浆蛋白，例如清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原和铁传递蛋白等。由Wistar研究所提供的HepG2细胞是合适的转染宿主，其标志物包括胰岛素和胰岛素样生长因子II（IGFII）。HepG2细胞通常会聚集成片状，并在培养过程中初期紧密附着于培养瓶壁，形成小岛状结构，后期可能表现为多层堆积或悬浮状态。由于其良好的贴壁性，HepG2细胞广泛用于研究肝细胞功能及病毒模型。

【传代培养】HepG2细胞为贴壁生长，处理步骤如下：1. 在细胞脱落的情况下，将培养液转移至无菌离心管中，进行离心（125g，3-5分钟）以收集悬浮细胞。轻柔去除培养基，将贴壁细胞消化并混匀后接种。2. 用PBS清洗贴壁细胞1-2次，添加胰酶，轻轻摇匀，放入培养箱中消化，观察细胞变化，待大部分细胞脱落后加培养基中和。3. 将细胞悬液转移至离心管中计数，并用适量的培养基重悬细胞使其达到每毫升0.6-2×10^5的浓度，然后转至培养瓶中。

【细胞冻存】细胞密度达到80 %以上且活细胞数量超过95 %时，进行冻存处理。收集细胞沉淀后，用适量的4°C冻存液重悬，并按比例分装至冻存管中。将冻存管置于-80℃超低温冰箱过夜，随后可转移至液氮中长期保存。

【细胞复苏】从液氮中取出冻存细胞，尽快进行解冻，并在37°C水浴中迅速恢复（约1-2分钟），随后消毒冻管外壁。将细胞转移至含有培养基的离心管中，离心去除培养基后适量重悬细胞，转移至新的培养瓶中，静置于培养箱中继续培养。

【常见问题】在培养过程中，细胞内外可能出现黑色颗粒，这通常是细胞分泌泡和细胞代谢产物的积累，属于正常现象。对于细胞生长缓慢的情况，可以适当增加血清比例，确保细胞能够更快地增殖。细胞聚团或不易贴壁的情况常与血清品牌及培养基的pH值有关，确保使用高质量的血清能改善细胞的贴壁性。同时，对于HepG2细胞中的空泡现象无需担心，这并不影响细胞的正常生长。

【注意事项】HepG2细胞对培养条件有较严格的要求，特别是pH值和血清质量。使用优质的胎牛血清能够提高细胞的生长及贴壁性。此外，建议使用尊龙凯时品牌的培养液，以保持细胞的稳定与活力。定期观察培养中的pH和培养基颜色变化，确保始终处于最佳状态，目前已有多篇文献支持其在生物医学研究中的广泛应用。

截至2024年，引用中乔新舟研究所发表的HepG2相关文献已达72篇，整体影响因子达到467.07。这些研究为HepG2细胞的应用提供了有力的证据，确保了在生物医疗领域的广泛认可。