近年来，肠癌的发病率持续上升，并呈现出年轻化的趋势。类器官技术的问世，为探究肠癌的发病机制和寻找有效治疗靶点带来了新的希望和发展方向。在人肠癌类器官的培养过程中，必须添加多种生长因子和信号通路调节因子，以模拟肿瘤微环境，从而支持类器官的长期培养。

初始培养阶段

在初始培养阶段，Wnt信号通路的激活因子Wnt-3a和R-spondin-1是维持干细胞增殖和类器官形成的关键因子。同时，BMP信号通路的抑制因子Noggin作用于抑制BMP信号通路，以维持干细胞的未分化状态。此外，表皮生长因子EGF能够促进上皮细胞的增殖，而Rho激酶抑制剂Y-27632则用于抑制细胞凋亡，从而促进干细胞的存活，通常在初次培养时添加。

二维保持与扩增阶段

在二维保持和扩增阶段，Wnt信号通路激活因子R-spondin-1和Wnt-3a依然被使用，而Noggin也继续作为BMP信号通路的抑制因子。同时，EGF能够维持细胞的增殖。TGF-β信号通路的抑制剂如A83-01被引入，以防止细胞的过度分化。此外，其他小分子抑制剂，如p38MAPK激酶抑制剂SB-202190，能够显著提高类器官的形成效率和稳定性。

肿瘤特异性培养阶段

进入肿瘤特异性培养阶段，BMP信号通路的抑制因子Gremlin-1显著促进肠癌类器官的生长。同时，IL-6在肿瘤微环境中的表达显著增加，助力肠癌类器官的生长。

优化与特殊应用阶段

在优化和特殊应用阶段，Notch信号通路激活因子Jagged-1用于维持类器官的增殖。此外，根据具体实验需求，其他生长因子如HGF和FGF10也可被添加。在人肠癌类器官的培养中，以经典的WNER组合（Wnt-3a、Noggin、EGF和R-spondin-1）为基础，并依据肿瘤微环境中的特异性因子（如Gremlin-1和IL-6）进行调整，能够更好地模拟肠癌的生长环境。

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